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Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞的操作步驟
更新時間:2022-03-07   點擊次數(shù):767次

一.RAW264.7細(xì)胞

細(xì)胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織,是科研上尤為常用的炎癥細(xì)胞模型之一。該細(xì)胞易于增殖,有高效DNA轉(zhuǎn)染力,對RNA干擾敏感,常用作轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞和復(fù)制小鼠諾如病毒。細(xì)胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原陰性。據(jù)報道,該細(xì)胞建系后已不分泌且檢測不到病毒顆粒,XC斑點形成實驗陰性。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞,LPS或PPD處理2天后可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。

二、產(chǎn)品說明

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號:AD600150

規(guī)格:1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。

三、產(chǎn)品應(yīng)用

各種細(xì)胞類型中最高的轉(zhuǎn)染效率。

可用于多種真核細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染;

可用于各種原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染;

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞,如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等;

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞。

四、使用說明

1、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素 )

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。


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